摘要：訶子又名訶黎、訶黎勒、隨風子，為使君子科植物的果實。訶子作為中藥在中醫臨床上廣泛使用，用于油脂抗氧化方面的研究在國內已見有專門報道。訶子果實中含豐富的鞣質和多元酚類，約為30%～40%已有文獻報道，鞣質和多元酚類具有較好的抗氧化性。目的建立訶子提取物中鞣花酸含量的高效液相色譜(HPLC)測定方法。方法色譜條件Shim-packCLC-ODS色譜柱(150mm×6mm，5μm)，柱溫30℃,用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(體積比30∶2∶68)作為流動相,檢測波長為254nm。結果鞣花酸在0.268～5.36μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。平均加樣回收率為98.42%,RSD為1.13%(n=5)。結論該方法快速、簡便、準確，可用于訶子中鞣花酸的含量測定。
【關鍵詞】訶子;鞣花酸;高效液相色譜
鞣花酸(2，3，7，8-tetrahydroxybenzopyrano[5，4，3-cde]benzopyran-5，10-dione)是一種植物多酚類化合物[5](如圖1)，為訶子中主要的活性成分之一，廣泛存在于各種自然的軟果、堅果等植物果實中。它對化學物質誘導癌變及其他多種癌變有明顯的抑制作用，它能與人體內有害自由基結合，具有強力祛癌變功效，可以抗衰老、增加機體免疫，還具有降壓、鎮靜作用，對多種細菌、病毒有很好的抑制作用[6]。因此鞣花酸有“克癌之星”“致癌物清除劑”之美稱。從機理上講，鞣花酸是一種抗氧化劑[7]，它可作為保健食品添加劑，研究、開發本品具有較高的經濟價值和廣泛的應用范圍。
本實驗建立了HPLC法測定訶子中鞣花酸含量的方法，并對文獻報道的多種色譜條件進行了比較[8～10]，表明本文方法精確可行。
1儀器與試劑
日本島津SPD-10AT高效液相色譜儀;SPD-10Avp檢測器;SIL-10AP自動進樣器;超純水器(arium611UF，Sartorius);超聲波清洗器(AS3120A，天津瑞森特);電子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奧豪斯公司);旋轉蒸發儀(R-200，瑞士Buchi)。島津UV2100型，甲醇為色譜純;實驗用水為超純水，蒸餾水自制，其它試劑均為國產分析純試劑。
鞣花酸對照品(購自購自成都普瑞法科技開發有限公司),純度≥98%。訶子(產自云南臨倉和緬甸)。
2方法
2.1色譜條件色譜柱為島津Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm，5μm)，柱溫30℃，用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(體積比34∶2∶64)作為流動相，檢測波長為254nm。
2.2對照品溶液的制備精密稱取鞣花酸對照品6.7mg，加甲醇25ml制成每毫升含0.268mg的對照品溶液。
2.3供試品溶液的制備精密稱取訶子粉(均過60目篩)約1g，置于100ml具塞三角燒瓶中，加60%乙醇25ml，超聲提取60min，過濾，用60%洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，50℃旋轉蒸干，加甲醇定容至10ml，以0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為樣品供試液，進樣10μl。
2.4標準曲線制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl進樣，測定峰面積，并以色譜峰峰面積(A)對對照品的量(m)回歸(包括原點)，得回歸方程為A=7.5777E 06m 9.6700E 05(R=0.9999)。鞣花酸0.268～5.36μg范圍內，線性關系良好。
2.5精密度和樣品重復性實驗重復進對照品溶液10μl/次，測得鞣花酸峰面積相對標準偏差RSD=0.9%(n=6);對同一樣品按擬定的方法作多次測定，其含量相對標準偏差RSD=2.1%(n=5)。
a-鞣花酸對照品b-訶子樣品
2.6回收率實驗采用加樣回收法取已知量的訶子，分別添加一定量的鞣花酸對照品，按擬定的方法測定，結果平均回收率為98.42%,RSD為1.13%(n=5)。
2.7樣品測定按上述“2.3”項樣品液制備方法測定云南產訶子和緬甸產訶子中鞣花酸的含量,云南產訶子和緬甸產訶子的鞣花酸含量分別為0.573mg/g(RSD=3.4%)和0.567mg/g(RSD=4.2%)。
3結果
3.1最佳檢測波長的選擇對鞣花酸對照品甲醇溶液的紫外-可見光(200～600nm)掃描發現，鞣花酸在254nm有最大吸收，故選擇254nm為其檢測波長。
3.2流動相的選擇實驗發現，若僅用甲醇和水作流動相，很難實現多酚物質的分離。通過改變流動相的pH值來提高分離度，由于pH太低會損壞色譜柱，導致柱效降低。本實驗選用磷酸和磷酸鹽緩沖體系，醋酸乙酯和甲醇作流動相，流動相中加入了一定量的磷酸，對鞣花酸起離子抑制作用，使其與雜質峰達到很好地分離。
3.3流速對分離度的影響在一定流速范圍內，流速減少，柱效提高，分離度變大。但若流速過慢，分析時間延長，縱向擴散的影響變大，柱效降低。雖然提高流速可縮短分析時間，但若流速過高，物質來不及分離就被洗出，分離效果差，而且會損壞泵頭和色譜柱。因此，流速對分離度的影響也很大。最終確定流速為1.0ml·min-1時，出峰時間和分離效果均較滿意。
4結論
本法操作簡單，結果準確，重復性好，可作為該產品的質量控制方法。由于訶子提取物具有良好的藥用價值，對多個系統疾病具有良好的治療作用，具有較好的開發前景。本研究采用HPLC法測定訶子中鞣花酸含量，方法快速、簡便、準確，測定結果可靠，為訶子在食品開發及醫藥應用上提供科學依據。
(來源：中國化工儀器網)
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